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掌握合成双链cDNA的RLM-RACE技术可构建高質量的cDNA文库。
1. MDF-192型超低温冰箱日本三洋电机株式会社;
13. XK96-B微型旋涡混合仪,江苏省姜堰市新康仪器厂
以反转录第一链cDNA为模板,按以下组分建立PCR反应体系:
充分混匀,按以下程序进行PCR扩增:95℃热变性2 min迅速加入高保真酶,再94℃变性2 min进入循环94℃变性30 秒,65℃退火30秒68℃延伸2 min,25個循环后于68℃继续延伸10 min扩增产物以琼脂糖凝胶电泳检测,置于-20℃保存备用
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