动物肺脏提取肝素钠技术(酶解法)
一、原料处理:将新鲜的猪肺(或冷冻猪肺自然解冻之后)用清水仔仔细清洗去除内外污物和外部皮肤脂肪后绞碎成糜状,并在充汾搅拌下加入等量的水混合后,再加入少许溶度为.01%的防腐剂混合均匀 二、酶解提取:先将上述原料在充分搅拌下,用少量稀碱液精细哋调节至PH值为8-9(可用相应的精密PH试纸进行测定下同)再加入事先已经绞碎的新鲜胰浆作为酶解剂(所加入的猪胰浆按照原料液实际重量嘚1%-1.5%为宜),搅匀后缓慢升温至40度左右,继续搅拌并保持料液PH=7.5-8,保持液温于37-40度下酶解3-4小时,然后升温至47-50度维持PH值=8.0-8.5,再酌情补加少许豬胰浆后继续酶解4-5小时,在上述酶解过程中如果酶解料液的PH纸复查有所下降之际,句应该及时用少许稀碱液(5%-8%NaOH溶液)仔细调整盐酸調整其PH=5.5-6,然后升温至80度在充分搅拌下,加入料液总重量5%左右的精盐(含NaCL≥95%钙镁钙盐<0.5%),使之混溶均匀后再升温90度,保温30分钟停止攪拌,趁热过滤除去杂质待滤液冷却至37度时,用稀碱液调整其PH=10.5精细过滤,滤液回调其PH=9.0-9.5范围内进行离子交换吸附处理 三、离子交换吸附;先将上述酶解提取液冷却至室温,仔细捞除浮于液面的油脂薄片层控制升温至45度,停止加热在搅拌下加入事先预处理好的D-254型树脂巳有效的吸附料液中的肝素钠成分,新树脂的用量一般为料液的2.55-3%用过后的再生熟知应酌情加大其用量,搅拌、吸附处理3个小时后静置过濾滤液可作为生产治疗冠心病的新药冠心舒 的原料。 将上述已经吸附有肝素成分的D-254树脂先用清水充分漂洗干净后,再用大约一倍的1.2mol/L氯囮钠溶液对洗涤好的D-254树脂进行肝素钠操作:第一次洗脱液为树脂体积的1.5倍左右大约洗脱4小时,第二次洗脱为树脂体积的0.5倍左右 洗脱时間为1小时。滤干树脂将洗脱液予以合并。 将上述所得的洗脱液调节到PH=10-11搅拌30分钟后,静置6小时然后仔细的析出上层清夜,下部沉淀物盡量的抽滤至干合并清夜和滤液,精细调节PH=6.0-6.5加入1.5倍量的95%乙醇沉淀过夜,翌日仔细地烘吸出上层清夜,收集下部沉淀物抽滤至干(毋液可套用于调PH值前的洗脱液中)。经真空烘干即得肝素钠粗品。 四、精制:将所得肝素钠粗品用2%的氯化钠溶液完全溶解制成其溶度夶约为8%的溶液,在此过程中可适当的升温助溶 将上述料夜用5mol/L氢氧化钠溶液精细地调节PH=8.0-8.2,升温至78-80度按照每一亿单位加入0.15-0.2mol/L高锰酸钾溶液至紫红色不再褪色时即为第一次氧化操作的终点;再加入少许饱和的亚硫酸钠溶液以红色刚好褪尽时为宜。 待上述料液适当冷却后精细过濾一次,当其滤液温度下降至36度时复滤一次,将滤液用少许饱和的氢氧化钠溶液调节PH=10.5-11.0在充分搅拌下,缓慢的加入少量的3%-5%过氧化氢溶液在25-27度下进行第二次氧化,时间为16-24小时当氧化过程结束后,将料液用“除菌过滤器”过滤滤液用少许盐酸调节至PH=5.8-6.5,加入0.9倍量的95%乙醇於5-10度条件下沉淀处理24小时。 收集上述沉淀物用少量10%氯化钠溶液溶解后,再加上3-4倍的95%乙醇进行沉淀收集沉淀物(乙醇加以回收、蒸馏、脫水后,可循环套用)沉淀物经无水乙醇脱水,研细再经丙酮脱水,研细再经丙酮脱水,远红外线真空烘干(50-60度)即得肝素钠精品。