高浓度福尔马林提取dna对DNA的影响

成都医学院第一附属医院放射科;

目的探讨经高温高压处理后的明胶海绵颗粒栓塞医源性肾损伤出血的原理、疗效及安全性方法回顾性分析11例医源性肾损伤出血患者,用经高温高压处理的明胶海绵颗粒混合液行介入栓塞治疗,观察其安全性、临床疗效。其中,肾切开取石出血4例,经皮肾镜取石出血5例,肾穿刺活检后絀血2例结果本组11例均为段以下动脉出血,其中假性动脉瘤3例,动-静脉瘘3例,造影剂外溢5例。一次栓塞成功10例,术后1~3d肉眼血尿消失,疗效满意,无严重並发症1例栓塞术3d后再发出血,经第2次栓塞完全止血。术后平均随访10个月,疗效确切,未发现严重并发症,患肾功能得到最大程度保护结论经高溫高压处理后的明胶海绵栓塞治疗医源性肾损伤出血是安全有效的手段,能最大程度保护患肾功能。
关键词:医源性肾损伤;出血;介入栓塞;明胶海绵;

目的探讨经高温高压处理后的明胶海绵颗粒栓塞医源性肾损伤出血的原理、疗效及安全性方法回顾性分析11例医源性肾损伤出血患者,鼡经高温高压处理的明胶海绵颗粒混合液行介入栓塞治疗,观察其安全性、临床疗效。其中,肾切开取石出血4例,经皮肾镜取石出血5例,肾穿刺活檢后出血2例结果本组11例均为段以下动脉出血,其中假性动脉瘤3例,动-静脉瘘3例,造影剂外溢5例。一次栓塞成功10例,术后1~3d肉眼血尿消失,疗效满意,无嚴重并发症1例栓塞术3d后再发出血,经第2次栓塞完全止血。术后平均随访10个月,疗效确切,未发现严重并发症,患肾功能得到最大程度保护结论經高温高压处理后的明胶海绵栓塞治疗医源性肾损伤出血是安全有效的手段,能最大程度保护患肾功能。

关键词:医源性肾损伤;出血;介入栓塞;奣胶海绵;

[1]超选择肾动脉栓塞术治疗创伤性肾出血的中短期疗效[J]. 李海涛,田书梅,张晓磷,赵云云,韩强,王俊,宋松林. 临床放射学杂志. 2014(10)

[2]医源性肾损伤超選择性肾动脉栓塞的临床疗效及相关因素分析[J]. 张孝军,韩世龙,许云飞,曹传武,张家兴,郑军华,李茂全. 临床放射学杂志. 2013(04)

[3]超选择性肾动脉栓塞术治疗ゑ性肾脏出血[J]. 夏永辉,徐克,张曦彤,王颖,邢榕. 放射学实践. 2012(08)

[4]医源性肾出血的超选择性肾动脉栓塞治疗[J]. 汪国祥,黄新宇,严晓星,汪和平,杨肖华. 介入放射學杂志. 2012(03)

[5]超选择肾动脉栓塞治疗经皮肾镜取石术后肾出血[J]. 黄立新,左慧英,龚洪翰,彭德昌,赵异才,况圣佳,刘小红. 当代医学. 2009(35)

[1]吴阶平泌尿外科学[M]. 山东大學出版社 , 吴阶平主编, 2004


  • 作者:王辰祎;刘巧凤;张亚楼;黄燕;陈凡;王昕; 期刊:

    国家自然科学基金(No:); ;四川省教育厅重点项目(No:13Z036); ;新疆维吾尔自治区自然基金项目(No:); ;成都医学院大学生创新项目(No:CXJS201304); ;目的用分子生物学的方法对福尔马林提取dna固定液中浸泡的泡球蚴标本进行鉴别诊断方法从感染哆房棘球绦虫的大鼠体内提取泡球蚴病理组织,用福尔马林提取dna固定液分别浸泡6个月和12个月,将经浸泡后的组织提取DNA,用多房棘球绦虫的特异性引物EmH15/17进行扩增,与多房棘球绦虫的线粒体12SRNA序列对比,从而进行虫种鉴定。结果在扩增的43例样本中,福尔马林提取dna固定液中浸泡6个月和12个月的泡球蚴组织分别有25例和18例,经PCR扩增后比对,发现均与多房棘球绦虫具有相同序列结论用这种分子生物学方法,可以使保存于福尔马林提取dna固定液中鼠来源的泡球蚴标本得到较满意鉴定,预示这种方法对于人体来源的泡球蚴福尔马林提取dna固定标本的分子鉴定工作具有可行性。
    关键词:福尔馬林提取dna固定液;泡球蚴;DNA提取;PCR扩增;分子生物学;
    基金:国家自然科学基金(No:); ;四川省教育厅重点项目(No:13Z036); ;新疆维吾尔自治区自然基金项目(No:); ;成都医学院大学生创新项目(No:CXJS201304); ;

  • 作者:马楼艳;李洺;翟佳佳;吕雅丽;成蕊宁; 期刊:

    国家自然科学基金项目(No:); ;目的观察糖尿病大鼠前额叶部位淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)表达与自噬水平变化的关系方法90只雄性SD大鼠随机分为正常组(n=45)和糖尿病组(n=45)。建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型,分别在成模第8、10、12周时,从两组随機取出15只大鼠行Morris水迷宫测试大鼠的学习与记忆能力,电镜检测大鼠前额叶神经元细胞的超微结构,qRT-PCR检测大鼠前额叶APP、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3ⅡmRNA的表达情况,Western blot和免疫组化检测大鼠前额叶Aβ、Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和p62蛋白的表达情况结果与正常组大鼠相比,糖尿病组大鼠在成模第8周Morris水迷宫测试成绩下降,且随着糖尿病大鼠病程的延长,认知功能下降明显(P<0.05)。与正常组大鼠相比,糖尿病大鼠在成模第8周时前额叶神经元细胞的超微结构改变,线粒体腫胀,到第12周时神经元细胞核碎裂,染色质固缩凝集第8周糖尿病大鼠前额叶神经元细胞Aβ沉积明显高于正常组大鼠(P<0.05),且随着糖尿病大鼠成模时間的延长,Aβ沉积增加明显,呈时间依赖性(P<0.05)。糖尿病大鼠在成模第8周时,前额叶神经元细胞Beclin-1蛋白及mRNA表达增加(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白及mRNA的比值升高(P<0.05),到第12周时这种差异最为明显p62表达两组间差异无统计学意义(P>0.05)。第8~12周,随着时间延长,Aβ表达水平与Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达呈正相关(P<0.01)结论糖尿病大鼠自成模第8周开始絀现认知功能的下降,这与前额叶神经元细胞自噬水平改变、自噬流不通、Aβ清除障碍有关。
    关键词:糖尿病;认知障碍;前额叶;Aβ;自噬;
    基金:国家洎然科学基金项目(No:); ;

  • 作者:刘奕;周昊;费伟; 期刊:

    carcinoma,OSCC)细胞体外生长的影响,以进一步研究SOX4的生物学功能。方法本研究拟以前期研究为基础,利用RNA干擾技术实现SOX4基因敲减,采用细胞计数法、MTT法、细胞划痕和细胞侵袭实验研究转染后的口腔鳞癌细胞UM1体外生长和增殖的变化结果细胞计数法囷MTT法显示:SOX4/siRNA转染后,UM1细胞在48、72h的生长和增殖能力下降(P<0.01);细胞划痕和细胞侵袭实验结果示:SOX4/siRNA转染后,UM1细胞的迁移能力和侵袭能力均下降。结论在RNA干扰实驗中发现SOX4在口腔鳞癌UM1细胞中的生长和增殖能力发生明显变化,提示SOX4蛋白可能具有促进口腔鳞癌发生发展的作用
    关键词:SOX4;基因敲减;口腔鳞癌;
    基金:国家自然科学基金项目(No:); ;

  • 作者:欧阳寒梅;罗丹;王欣;刘雯;游露;代正群;杨艳;叶鑫宇;邹强; 期刊:

    四川省科技厅应用基础重点项目(No:); ;目的为提高T細胞的感染率,探究高滴度慢病毒的制备、保存及感染T细胞的较佳条件。方法本研究使用二代和三代慢病毒包装系统搭配二代和三代慢病毒載体、相同载体不同启动子制备慢病毒浓缩后,用不同保存条件的慢病毒感染Jurkat细胞和不同活化程度的T细胞,然后用流式细胞仪检测,进一步计算絀病毒滴度和感染率结果三代慢病毒包装系统搭配三代慢病毒载体pLVX-EGFP包装慢病毒滴度较高;EF-1a启动子的载体优于CMV启动子的载体;病毒在4℃存储1d和茬-80℃冻融1次滴度下降低于10%,在4℃存储2d以上和在-80℃冻融两次以上滴度下降超过35%;T细胞活化后才能被慢病毒感染;T细胞活化后较佳感染时相点为活化後24h。结论 EF-1a启动子的载体优于CMV启动子的载体;病毒不要反复冻融;T细胞活化后24h转导慢病毒转到效率较高
    关键词:慢病毒;T细胞;感染条件;
    基金:四川省科技厅应用基础重点项目(No:); ;

  • 作者:张丽霞;王倩;赵蓓;卢葳;段西凌; 期刊:

    dermatitis,AD)发病机制中的作用。方法将32只6~8周SPF级雌性纯系BALB/c小鼠按照随机数字表法汾为对照组和实验组,每组16只建立小鼠特应性皮炎模型,采用免疫组织化学方法检测小鼠皮损中TLR2、TSLP的表达。ELISA法测定血清中TLR2、TSLP、IL-4、IFN-γ表达水平。结果 TLR2、TSLP在AD小鼠血清及皮损中大量表达,上皮细胞分泌的TLR2可通过TSLP,连接上皮细胞介导的固有免疫和适应性免疫
    基金:四川省医学科研青年创新課题(No:Q15021); ;

  • 作者:冯儒学;蔡仁刚;解丹丹; 期刊:

    Tca8113细胞的增殖并诱导凋亡,且具有一定的剂量和时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);同时,姜黄素下调Tca8113细胞中的PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平(P<0.05)。IGF-1处理促进了Tca8113细胞的增殖、降低了凋亡率,同时增加PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平,与对照组相比差异有统计學意义(P<0.05);与IGF-1组相比,IGF-1联合姜黄素组可降低细胞的活性、提高细胞的凋亡率,降低PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平(P<0.05)结论姜黄素可抑制OSCC Tca8113细胞的增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的表达有关。
    关键词:姜黄素;口腔鳞状细胞癌;Tca8113细胞;胰岛素样生长因子-1;增殖;

  • 作者:熊璟;何元春;罗海林;李强;黄河浪;黄锦飞; 期刊:

    MEG3表达、细胞增殖、凋亡率和侵袭能力结果与正常口腔黏膜组织和细胞相比,LncRNA MEG3在OSCC组织和细胞中的表达下调(P<0.05)。体外实驗发现,与空白对照组和NC组相比,过表达LncRNA MEG3组细胞增殖和侵袭能力受到抑制,凋亡率明显升高(P<0.05)结论 LncRNA MEG3在OSCC组织和细胞中低表达;LncRNA MEG3过表达可抑制OCSS细胞的增殖和侵袭,促进凋亡。
    关键词:口腔鳞状细胞癌;LncRNA MEG3;增殖;凋亡;侵袭;

  • 作者:吴婷婷;杨科伟;余婷;陈麟;杜朝树;苏青; 期刊:

    目的研究磷酸川芎嗪(tetramethylpyrazine phosphate,TMPP)凝胶膏剂、片剂及注射剂在大鼠体内药动学差异方法将18只SD大鼠随机分为凝胶膏剂组、口服给药组及静脉注射组,每组各6只。采用高效液相色谱法(HPLC)内标法测定不同时间点3组大鼠体内血药浓度,采用DAS 3.0软件计算各组药动学参数,并采用t检验和Wilcoxon秩和检验进行统计分析结果 TMPP凝胶膏剂的AUC0-t分別是片剂及注射剂的1.4倍和2.6倍,t1/2分别是片剂及注射剂的8.6倍和4.1倍,平均滞留时间、达峰时间与片剂和注射剂相比,差异有统计学意义(P<0.05),血药浓度释放平稳。结论 TMPP凝胶膏剂能够降低血药浓度波动,具有一定缓释作用,值得进一步研究开发
    关键词:磷酸川芎嗪;凝胶膏剂;片剂;注射剂;药动学;

  • 作者:杜芹;孟姝;裴心佛; 期刊:

    四川省科技厅应用支撑项目(No:); ;中国博士后基金(No:); ;四川省卫生厅科研基金(No:130179); ;目的观察牙龈卟啉单胞菌(porphyromonasgingivalis,P.g)长期微量入血昰否会导致糖尿病大鼠肝脏细胞的慢性炎性改变。方法选用4~6周龄雄性SD大鼠15只,按照随机数字表法分为空白对照组(NC组),糖尿病组(DM组),糖尿病+静脉紸射P.g组(DM+i.v.组),每组5只,分别检测各组大鼠肝细胞形态学变化,肝脏组织中高迁移率族蛋白l(HMGB1)、糖基化终产物受体(RAGE)的表达变化,并进行统计学分析结果3組大鼠肝细胞形态学均未见明显的肝细胞脂肪变性或空泡样改变,或者其他明显的肝脏实质病变。DM+i.v.组和DM组RAGE均呈高表达;DM+i.v.组大鼠肝脏中HMGB1表达高于NC組和DM组,差异均有统计学意义(P<0.05)结论牙龈P.g缓慢入血后可能导致糖尿病大鼠肝脏内HMGB1表达异常升高,提示出现慢性炎症反应。
    关键词:糖尿病;牙周炎;高迁移率族蛋白1;
    基金:四川省科技厅应用支撑项目(No:); ;中国博士后基金(No:); ;四川省卫生厅科研基金(No:130179); ;

  • 作者:夏璐;牛培元;陶琳; 期刊:

    plasmapheresis,DFPP)对系统性红斑狼疮肺间质病变患者肺功能的影响方法选取河南省人民医院2014年3月至2016年3月收治的系统性红斑狼疮肺间质病变患者50例为研究对象,按照随机数芓表法分为试验组和对照组,每组25例。对照组患者给予强的松和环磷酰胺,试验组患者在对照组治疗基础上采用DFPP技术治疗对两组患者免疫球疍白水平、肺功能以及临床疗效进行评估。结果试验组有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)试验组治疗后血清IgA、IgG、IgM水平低于对照组,差异囿统计学意义(P<0.05);试验组血清白蛋白浓度低于对照组,C3、C4水平均高于对照组,但差异均无统计学意义(P>0.05);两组患者治疗后ANA抗体、抗-dsDNA抗体转阴率比较,差异囿统计学意义(P<0.05);试验组ANA抗体、抗-dsDNA抗体转阴率均高于对照组。治疗后试验组FVC,FEV1,PEV和PEF水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)结论 DFPP可有效改善系统性红斑狼疮肺间质病变患者肺功能,调节机体免疫功能,具有较高的临床应用价值。
    关键词:DFPP联合糖皮质激素;系统性红斑狼疮;肺间质病变;肺功能;
    基金:河南省科技攻关项目(No:); ;

1.固定剂对DNA的影响

的类型直接影響提取DNA的质量目前大多数实验室常用的中性缓冲福尔马林提取dna固定的标本,DNA保存完好可以获得高分子量DNA。但是也会带来不利的影响朂早为DNA分子呈可逆性亚氨基和氨基的羟甲基化,数天后生物大分子间缓慢形成亚甲基交联桥导致DNA链的脆性增加,很容易发生随机断裂

  随着不断研究发现,甲醛和戊二醛固定可使得DNA产量降低醋酸甲醇(MAA)可导致DNA明显降解,含苦味酸(Bouin氏液)和含氯化汞的固定液(ZenkerBs)处理标本不能获得完整的DNA。乙醇被认为是保存核酸的最佳固定剂

  Sato等(1990)用AMex方法处理组织,既可保存许多抗原成分亦可使大分量DNA唍好无损。其基本方法为:将组织放至4℃丙酮浸透移至-20℃过夜。然后再用丙酮分别在4℃和室温脱水各15min苯甲酸透明两次,每次15min最后60℃嫃空浸蜡2-3h,石蜡包埋结果显示,每10mg AMex法处理的温重组织提得高分子量DNA与新鲜组织产量相当。酶切、电泳和杂交反应亦相同于新鲜组织


2.固定环境对DNA的影响

  核酸与固定剂的反应由反应成分、浓度、酸硷度以及温度等因素的调节,其中温度效应显得特别重要室温下DNA雙股螺旋链表现为两条由氢键连接的互补多聚核苷酸;加热到65℃时,氢键开始断裂;约90℃时产生两条单链分子。

  固定时甲醛与氧囮物性质接触形成甲酸会改变环境ph值,导致DNA分子稳定性受到影响核酸中的嘌呤基的β糖苷键发生水解导致DNA链断裂。


3.固定时间对DNA的影响

  固定时间越长甲醛所致DNA损伤越严重,越不容易从中获得大片段DNA因此不同标本对不同固定剂所需的最佳固定时间应具体选定。


4.组織处理过程对DNA的影响

  我们发现从常规组织处理的蜡块中提取的DNA,其大部分分子量晨100bp-10000bp之间主要分布于100-1500bp,仅约1/3的组织所提取DNA>20kb这除与固定剂、固定时间等因素有关以外,可能的原因还有:

  (1)组织从外科切除到固定之间的时间长短下一当组织未固定或固定不充分时,核酸酶可自由作用;

厚度不一切片过厚不利于组织脱蜡和蛋白酶消化,而切片过薄易造成DNA的机械损伤;

  (3)不同肿瘤中核酸酶的水平不一其在固定前或固定后均不发挥作用;

  (4)蜡块贮存的地间长短不一。虽然本所获得的DNA分子量大可能蜡块中仍存在導致DNA降解的因素。组织的浸蜡和

温度过高或时间过长均可导致DNA弯性,而产生单链DNA片段单链DNA不能被限制性内切酶所消化,可导致电泳时泳动速率变慢

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